Yumuşak şankrda tanı lezyonun tipik görünümü, lezyondan yapılan direkt yaymalarda bakterinin gösterilmesi ya da kültürde üretilmesi ile konur. Tanı için cilt testi veya serolojik bir test yoktur. Kültür, lezyon üzerindeki nekrotik materyal serum fizyolojik ile yıkanarak kaldırıldıktan sonra kültür çubuğu lezyon kenarlarına sürülerek, ya da infekte lenf bezlerinden aspirasyon ile alınır. Aspirasyon fistül gelişimini önlemek için sağlam deriden girilerek yapılmalıdır. Alınan materyal hemen ekim yapılamayacaksa Amies taşıma ortamında taşınmalıdır. Ekim 3 mg/ml vankomisin içeren çukulata ağara yapılmalıdır. % 80 vakada pozitif sonuçlar alınır. H. ducreyi zincirler ve paralel agregasyonlar yapan küçük gram-negatif basiller şeklinde görülür.